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技術(shù)文章

小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)方法

更新更新時(shí)間:2019-12-27 瀏覽次數(shù):2775

平滑肌即無(wú)紋肌的通稱,平滑肌是由長(zhǎng)紡錘形的單核細(xì)胞構(gòu)成。它不構(gòu)成獨(dú)立的器官,而只是成為構(gòu)成體壁和內(nèi)臟壁的因素(肌層)。平滑肌細(xì)胞互相連接,形成管狀結(jié)構(gòu)或中空器官;在功能上可以通過(guò)縮短和產(chǎn)生張力使器官發(fā)生運(yùn)動(dòng)和變形,也可產(chǎn)生連續(xù)收縮或緊張性收縮,使器官對(duì)抗所加負(fù)荷而保持原有的形狀。

小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的收縮、舒張、增殖和凋亡與臨床許多疾病的病理生理過(guò)程有關(guān).如支氣管哮喘、慢性阻塞性肺疾病等。例如在哮喘發(fā)病時(shí),可以檢測(cè)到氣管平滑肌發(fā)生數(shù)目的增生和肥大,表型也發(fā)生改變,由收縮型轉(zhuǎn)為合成型與分泌型,并分泌多種與細(xì)胞因子;而且出現(xiàn)向氣管腔遷移的跡象。

 

小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞來(lái)源于實(shí)驗(yàn)動(dòng)物正常支氣管組織,長(zhǎng)梭狀細(xì)胞,貼壁培養(yǎng)。通過(guò)平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)免疫熒光染色鑒定為陽(yáng)性鑒定純度高于90%,不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌。

1.試驗(yàn)所需儀器設(shè)備及試劑

(1)儀器

儀器名稱

規(guī)格型號(hào)

廠家

生物安全柜

BSC-1500ⅡA2-X

濟(jì)南鑫貝西生物技術(shù)有限公司

CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱

BC-J160S

上海博迅實(shí)業(yè)有限公司

熒光倒置顯微鏡

DS-Ri2

Nikon

高速冷凍離心機(jī)

Multifuge X1R

Thermo Fisher

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱

DHG-9123A

上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司

(2)試劑耗材

試劑名稱

規(guī)格/貨號(hào)

廠家

T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

430639

Coming

血球計(jì)數(shù)板

Neubauer improved

Marienfeld

細(xì)胞培養(yǎng)孔板

WHB-24

上海臥宏生物科技有限公司

平滑肌細(xì)胞*培養(yǎng)基

PriMed-iCell-004

鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司

0.25%胰蛋白酶(含0.02%EDTA)

1734858

Gibico

 

2.小鼠支氣管平滑肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)

1) 取4-5周齡的小鼠,斷頸處死后,泡于75%的酒精中,

2) 剖開(kāi)胸腔,取出完整氣管及肺組織,放入無(wú)菌PBS中,

3) 在體視顯微鏡下,小心分離出下游支氣管,

4) 用眼科剪及鑷子分離肌層并剪碎,

5) 加入0.1% I + II + IV + dispase,4℃過(guò)夜消化,

6) 第二天置于37℃水浴搖床中消化2~3h,

7) 待液體變渾濁后加入*培養(yǎng)基終止消化,充分吹打,

8) 過(guò)100目篩網(wǎng),收集濾液,1000rpm離心5min,棄去上清,

9) 用*培養(yǎng)基重懸沉淀,鋪瓶。

除了上述的細(xì)胞分離方法以外,鏡像綺點(diǎn)還有很多關(guān)于其他細(xì)胞的分離方法,想要學(xué)習(xí)的小伙伴可以來(lái)鏡像綺點(diǎn)進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)學(xué)習(xí),如果想要其他原代分離培養(yǎng)方法,可在購(gòu)買(mǎi)相應(yīng)的細(xì)胞過(guò)程中,贈(zèng)送該細(xì)胞的分離方法及培養(yǎng)條件,想要了解更多,打電話或咨詢相關(guān)工作人員。

鏡像綺點(diǎn)(上海)細(xì)胞技術(shù)有限公司地址:上海市奉賢區(qū)茂園路260號(hào)臨港南橋科技城56號(hào)樓7層 郵箱:3982882774@qq.com

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