細胞轉(zhuǎn)染的類型及方法

更新更新時間：2017-10-09 瀏覽次數(shù)：4393

轉(zhuǎn)染（Transfection）是指將DNA或者RNA導入真核細胞中的過程。轉(zhuǎn)染的目的是產(chǎn)生重組蛋白，或特異性增強或抑制轉(zhuǎn)染細胞中的基因表達。細胞轉(zhuǎn)染有哪些類型和方法呢？

1）根據(jù)導入的核酸存在于宿主細胞的時間長短，可以分為瞬轉(zhuǎn)和穩(wěn)轉(zhuǎn)。

瞬轉(zhuǎn)	穩(wěn)轉(zhuǎn)
導入的DNA沒有整合到基因組中，而是保留在細胞核上	導入的DNA整合到基因組中
導入的遺傳物質(zhì)不傳遞到子代；遺傳改變只是暫時的	導入的遺傳物質(zhì)能夠代代相傳；遺傳改變是*的
不需要選擇性篩選	需要選擇性篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞
DNA載體和RNA都可用于瞬時轉(zhuǎn)染	只有DNA載體可用于穩(wěn)定轉(zhuǎn)染；RNA本身不能穩(wěn)定地導入細胞中
導入的遺傳物質(zhì)的高拷貝數(shù)導致高水平的蛋白質(zhì)表達。	單拷貝數(shù)或低拷貝數(shù)的穩(wěn)定整合的DNA導致較低水平的蛋白質(zhì)表達。
通常在轉(zhuǎn)染后24-96小時內(nèi)收獲細胞。	需要2-3周的時間篩選出穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的細胞克隆。
通常不適合使用具有誘導型啟動子的載體的研究。	適用于使用帶有誘導型啟動子的載體的研究。

2）根據(jù)轉(zhuǎn)染方式可以分為化學，生物，物理方法。

轉(zhuǎn)染類型	轉(zhuǎn)染方法	原理	應用	特點
化學轉(zhuǎn)染法	磷酸鈣法	磷酸鈣DNA復合物吸附細胞膜被細胞內(nèi)吞	穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)	不適用于原代細胞，操作簡便但重復性差，有些細胞不適用
	陽離子脂質(zhì)體法	帶正電的脂質(zhì)體與核酸帶負電的磷酸基團形成復合物被細胞內(nèi)吞	穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) 所有細胞	適用性廣，轉(zhuǎn)染效率高，重復性好，但轉(zhuǎn)染時需除血清。轉(zhuǎn)染效果隨細胞類型變化大
	DEAE-右旋糖苷法	帶正電的DEAE-右旋糖苷與核酸帶負電的磷酸骨架相互作用形成的復合物被細胞內(nèi)吞	瞬轉(zhuǎn)	相對簡便、結(jié)果可重復，但對細胞有一定的毒副作用，轉(zhuǎn)染時需除血清
生物轉(zhuǎn)入法	病毒介導法	通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	穩(wěn)轉(zhuǎn)	可用于難轉(zhuǎn)染的細胞、原代細胞，體內(nèi)細胞等
	逆轉(zhuǎn)錄病毒		特定宿主	但攜帶基因不能太大細胞需處分裂期，需考慮安全因素
	腺病毒	通過侵染宿主細胞將外源基因整合到染色體中	瞬時轉(zhuǎn)染特定宿主	可用于難轉(zhuǎn)染的細胞需考慮安全因素
物理轉(zhuǎn)染法	Biolistic顆粒傳遞法	將DNA用顯微重金屬顆粒沉淀，再將包被好的顆粒用彈道裝置投射入細胞，DNA在胞內(nèi)逐步釋放表達	瞬轉(zhuǎn)	可用于：人的表皮細胞，纖維原細胞，淋巴細胞系以及原代細胞
	電穿孔法	高脈沖電壓破壞細胞膜電位，DNA通過膜上形成的小孔導入	穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn) 所有細胞	適用性廣但細胞致死率高，DNA和細胞用量大
	顯微注射法	用顯微操作將DNA直接注入靶細胞核	穩(wěn)轉(zhuǎn)，瞬轉(zhuǎn)	轉(zhuǎn)染細胞數(shù)有限，多用于工程改造或轉(zhuǎn)基因動物的胚胎細胞

二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法
1、材料
293T細胞、MyoD表達質(zhì)粒和EGFP表達質(zhì)粒、DMEM培養(yǎng)基、鏈霉素/青霉素(雙抗)、FCS(小牛血清)、PBS(磷酸鹽緩沖溶液)、胰酶/EDTA消化液、轉(zhuǎn)染試劑(TransFast)
2、器材
20ul/200ul/1ml微量移液器和Tip頭酒精燈、廢液缸、血球計數(shù)板、渦旋振蕩器、恒溫水浴箱、臺式離心機、35mm培養(yǎng)皿、轉(zhuǎn)染管、15ml離心管、觀察用倒置顯微鏡熒光顯微鏡和CCD
3、實驗步驟
細胞傳代
(1)試驗準備：200ul/1mlTip頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。

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